• о журнале
  • контакты
  • Помощь «Журналу G35»
SG35 - Журнал новости рассеянного склероза
  • Рассеянный Склероз
    • Симптомы РС
    • Исследования РС
    • Лечение РС
    • Восстановление
    • Разгадка тайн РС
    • Случай-X
    • Мнение эксперта
    • Нетрадиционные подходы
  • МРТ
  • Альцгеймер
  • БАС
  • Паркинсон
  • ПИТАНИЕ
  • Нейро обзор
  • Вебинары
  • Помощь
Нет Результата
Посмотреть все результаты
  • Рассеянный Склероз
    • Симптомы РС
    • Исследования РС
    • Лечение РС
    • Восстановление
    • Разгадка тайн РС
    • Случай-X
    • Мнение эксперта
    • Нетрадиционные подходы
  • МРТ
  • Альцгеймер
  • БАС
  • Паркинсон
  • ПИТАНИЕ
  • Нейро обзор
  • Вебинары
  • Помощь
Нет Результата
Посмотреть все результаты
SG35 - Журнал новости рассеянного склероза
Нет Результата
Посмотреть все результаты
Главная РС НОВОСТИ Восстановление

Тетрагидроканнабинол способствует развитию олигодендроцитов и миелинизации ЦНС

29.11.2021
в Восстановление, Неизвестная конопля, Нейрогенез, Нетрадиционные подходы
7 min read
0
Тетрагидроканнабинол способствует развитию олигодендроцитов и миелинизации ЦНС
0
ПОДЕЛИЛОСЬ
186
ПРОСМОТРЫ
Поделится в FacebookПоделится в ВКПоделится в Twitter

Тетрагидроканнабинол (ТГК), основное биологически активное соединение, содержащееся в растении Cannabis sativa., проявляет свое действие, активируя каннабиноидные рецепторы, присутствующие во многих нервных клетках. Рецепторы каннабиноидов также физиологически задействованы эндогенными каннабиноидными соединениями, так называемыми эндоканнабиноидами. В частности, эндоканнабиноид 2-арахидоноилглицерин был выделен как важный модулятор развития олигодендроцитов (OL) на эмбриональных стадиях и в моделях демиелинизации на животных. Однако потенциальное влияние воздействия ТГК на развитие линии OL в критические периоды постнатальной миелинизации никогда не исследовалось. Здесь мы показываем, что острое введение ТГК в раннем постнатальном возрасте у мышей усиливает развитие (OL) и миелинизацию ЦНС в подкорковом белом веществе, способствуя выходу из клеточного цикла-предшественника олигодендроцитов и дифференцировке. Механически миелинизация, индуцированная ТГК, опосредуется CB1 и CB 2 каннабиноидных рецепторов, что продемонстрировано блокадой действия ТГК селективными антагонистами рецепторов. Более того, ТГК-опосредованная модуляция олигодендроглиальной дифференцировки основана на активации у млекопитающих пути передачи сигналов комплекса 1 рапамицина (mTORC1), так как фармакологическое ингибирование mTORC1 предотвращает эффекты ТГК. Наше исследование определяет ТГК как эффективную фармакологическую стратегию для усиления олигодендрогенеза и миелинизации ЦНС in vivo.

ТГК ускоряет созревание олигодендроцитов (OL)

Полный процесс олигодендрогенеза ставит под угрозу переход через несколько стадий развития до образования зрелых полностью дифференцированных миелинизирующих клеток. Таким образом, мы оценили, вызывает ли введение ТГК не только дифференцировку OL, но и усиление образования зрелых миелинизирующих OL. Чтобы ответить на этот вопрос, мы использовали репортерную линию мыши CNP- mGFP (Deng et al., 2014 ), в которой экспрессия mGFP управляется промотором 2′-3′-циклических нуклеотид-3′-фосфодиэстеразы ( CNP ), который экспрессируется в клонах миелинизирующих клеток, что позволяет идентифицировать зрелые миелинизирующие OLs процессы, а также внутренние слои миелиновых оболочек для количественной оценки миелинизации ЦНС. Таким образом, 6-дневный CNPДетенышам мышей -mGFP вводили ТГК или носитель в течение четырех дней подряд, и мозг собирали в разные моменты времени (P10 и P15). Мы выполнили иммунофлуоресцентный анализ и количественно оценили состояние созревания OL в SCWM, включая CC (рисунок 2a – c ) и цингулюм (рисунок 2d ). Мы обнаружили повышенную плотность зрелых миелинизирующие ВЛ, как это отражено в большем числе CNP -mGFP + СС1 + двойных позитивных клеток (рис 2с ), совместно с более высоким процентом СС1 + ВЛ , что выражается зрелый маркер GSTπ (глутатион -S-трансфераза π) и более высокая плотность миелин-ассоциированного гликопротеина (MAG +) клеток в SCWM мышей, получавших ТГК (рис. 2d – g ). В целом, эти данные показывают, что дифференцировка OL, индуцированная ТГК, сопровождается усиленным созреванием OL во время постнатального развития.

Тетрагидроканнабинол способствует развитию олигодендроцитов и миелинизации ЦНС
ФИГУРА 2 ТГК ускоряет созревание олигодендроцитов. Введение ТГК в раннем постнатальном возрасте вызывает созревание OL в SCWM. ТГК (3 мг / кг) или Veh вводили от P6 до P9 мышам CNP- mGFP, а созревание олигодендроцитов анализировали в SCWM на P10 и P15. (a – g) Иммунофлуоресцентный анализ срезов мозга мышей CNP- mGFP, окрашенных на маркеры OL (CC1), зрелого OL (GSTπ или MAG) и OL-линии (Olig2) в SCWM на P10 и P15. Репрезентативные конфокальные изображения на P10 (a) или P15 (b, d, f) и количественная оценка зрелых OLs CC1 + CNP -mGFP + (c) и MAG + (g) плотности клеток, а также процентного содержания GSTπ + клеток в CC1 +население (е). Результаты выражаются в количестве клеток на мм 2 или в процентах клеток. (h – l) Культуры органотипических срезов мышей P8 CNP -mGFP стимулировали ТГК (1 мкм) или Veh в течение 4 дней и обрабатывали для иммунофлуоресцентного анализа. (I, K) Типичные конфокальные изображения и (к, л) определение количество CNP -mGFP + и GSTπ + клетки в СС1 + клетки или МАГ + плотности клеток в мозжечке белого вещества. Данные представлены как средние значения ± SEM . n = 5 животных для (c), n = 3 животных для (e, g) и n = 3 эксперимента для (j, l). ** р <0,01, ***р <0,001. Масштабные линейки: (a, b, d, f, i) = 10 мкм, (k) = 15 мкм. CC, мозолистое тело; CNP, 2′-3′-циклическая нуклеотид-3′-фосфодиэстераза; OL, олигодендроцит; MBP, основной белок миелина; MAG, миелин-ассоциированный гликопротеин; MOG, гликопротеин миелиновых олигодендроцитов; PLP, протеолипидный белок; SCWM, подкорковое белое вещество; ТГК, Δ 9 -тетрагидроканнабинол; Veh, автомобиль

Чтобы дополнить эти наблюдения, мы проанализировали влияние ТГК на органотипические срезы мозжечка, полученные от детенышей P8 CNP -mGFP (рис. 2h ). Анализ показал , Иммунофлуоресценции повышенного созревание населения ола в белом веществе ТГК обработанного мозжечка ломтиков , по сравнению с контрольной группой , измеряются как процент от CNP -mGFP + или GSTπ + клеток в пределах СС1 + клеток, и , как МАГ + плотность клеток ( Рисунок 2i – l ). В целом, эти данные показывают, что ТГК индуцирует дифференциацию OPC и увеличивает созревание OL.

3.3 ТГК способствует миелинизации ЦНС

Затем мы оценили, полностью ли завершена дифференцировка OL, вызванная ТГК, и трансформируется ли в усиление миелинизации. Таким образом, ТГК или носитель вводили детенышам P6 CNP- mGFP в течение четырех дней подряд, а миелинизацию SCWM анализировали в критические периоды постнатальной миелинизации. Количественная оценка фтормиелина (рис. 3a ), суданского черного окрашивания (рис. 3b ), сигналов GFP от трансгенной линии CNP- mGFP, а также экспрессии белков миелина MBP (основной белок миелина) и MOG (рис. 3c) показали повышенные уровни миелина и миелин-ассоциированных белков в группах мышей, получавших ТГК, по сравнению с контролем. Кроме того, мы количественно определили уровни миелин-ассоциированного белка в экстрактах SCWM от мышей, получавших ТГК, и контрольных мышей на P10 и P15 с помощью вестерн-блоттинга. Мы обнаружили повышенные уровни белка MBP, PLP, CNP, MOG и MAG в экстрактах SCWM от мышей, получавших ТГК, по сравнению с их контролем (рис. 3d, e ).

Тетрагидроканнабинол способствует развитию олигодендроцитов и миелинизации ЦНС
РИСУНОК 3 ТГК вызывает миелинизацию ЦНС. ТГК (3 мг / кг) вводили от P6 до P9 мыши CNP -mGFP. (а, в) Иммунофлуоресцентный анализ миелина в SCWM. (а) Окрашивание фтормиелином на P15 и количественная оценка реактивности на P10 и P15 в SCWM мышей, обработанных ТГК или Veh. (b) Окрашивание суданом черным у CC мышей, обработанных ТГК или Veh, на P15. (c) Мышей CNP — mGFP, обработанных Veh или ТГК , на Р15 иммуноокрашивали на MBP и MOG. (d) Типичные изображения сканирования вестерн-блоттинга и (e) количественная оценка уровней белка миелина в экстрактах SWCM от Veh или мышей, обработанных ТГК, на P10 и P15. Уровни белка были нормализованы относительно внутреннего контроля α-тубулина, относящегося к группе, получавшей Veh, и выражены в произвольных единицах (а.е.) (f) Культуры органотипических срезов из P8 CNPМышей -mGFP стимулировали ТГК (1 мкМ) или Veh в течение четырех дней подряд и выполняли иммунофлуоресцентный анализ. Репрезентативные конфокальные изображения и количественная оценка иммунореактивности (IR) MBP и MOG, выраженная в условных единицах (а.е.) в белом веществе культур срезов мозжечка, обработанных ТГК или Veh. Данные представлены как средние значения ± SEM . n = 3 животных для (a), n = 3–6 животных для (e) и n = 3 эксперимента для (f). * p <0,05, ** p <0,01, *** p<0,001. Масштабные линейки: (а, в) = 150 мкм, (б) = 220 мкм, (е) = 120 мкм. CC, мозолистое тело; CNP, 2′-3′-циклическая нуклеотид-3′-фосфодиэстераза; MBP, основной белок миелина; MAG, миелин-ассоциированный гликопротеин; MOG, гликопротеин миелиновых олигодендроцитов; PLP, протеолипидный белок; SCWM, подкорковое белое вещество; ТГК , Δ 9 -тетрагидроканнабинол; Veh, автомобиль

Мы расширили эти данные, выполнив эксперименты по культуре органотипических срезов мозжечка (рис. 3f ). Срезы мозжечка от 8-дневных детенышей CNP- mGFP подвергались воздействию ТГК (1 мкМ) или носителя в течение четырех дней подряд. Иммунофлуоресцентный анализ выявил повышенную иммунореактивность к MBP, MOG и CNP- mGFP в белом веществе мозжечка обработанных ТГК срезов по сравнению с контролем (рис. 3f ). В целом эти наблюдения указывают на то, что острое введение ТГК на ранних постнатальных стадиях усиливает созревание OL и миелинизацию ЦНС.

3.4 ТГК модулирует миелинизацию ЦНС посредством активации каннабиноидных рецепторов CB 1 и CB 2

Чтобы изучить механизм, с помощью которого ТГК модулирует развитие OL во время постнатальной миелинизации, мы сначала попытались проанализировать экспрессию рецепторов CB 1 и CB 2 в OL in vivo. С этой целью мышей NG2- Cre скрещивали с мышами Rosa-Ai6, индуцибельным репортерным штаммом, что позволяло Cre-зависимую экспрессию ZsGreen в клетках, производных от OPC. Анализ RT-PCR SCWM FAC-отсортированных клеток на P8 показал экспрессию транскриптов рецепторов CB 1 и CB 2 в клетках линии OLs (рис. 4a ). Чтобы выяснить возможный вклад обоих рецепторов в миелинизацию ЦНС, индуцированную ТГК, мы ввели каннабиноидный рецептор CB 1 (SR141716A, SR 1 ) и CB2 (SR144528, SR 2 ) селективных антагонистов рецептора 2 мг / кг, отдельно или в комбинации с ТГК, за 30 мин до ТГК, один раз в день от P6 до P9 и CNP- mGFP детенышей, и проанализировали дифференцировку OL и миелинизацию SCWM на P15. Иммунофлуоресцентный анализ маркеров OL в срезах SCWM показал, что либо антагонист рецептора CB 1, либо CB 2 предотвращает ускорение дифференцировки OL, индуцированной ТГК (рис. 4b-e ). Вестерн-блот-анализ экстрактов SCWM на P15 показал, что оба антагониста рецепторов предотвращали вызванное ТГК повышение уровней белка миелина в SCWM, таком как MAG, MOG или CNP (рис. 4f, g). Эти данные показывают, что ТГК индуцирует дифференцировку OPC и миелинизацию SCWM, активируя каннабиноидные рецепторы CB 1 и CB 2 .

Тетрагидроканнабинол способствует развитию олигодендроцитов и миелинизации ЦНС
РИСУНОК 4 ТГК модулирует миелинизацию ЦНС за счет активации каннабиноидных рецепторов CB 1 и CB 2 . (a) График FAC-сортировки популяции ZsGreen SCWM, выделенной из мышей NG2 -Cre: Ai6 на 8-й постнатальный день (P8, тамоксифен на P6 и P7). Анализ ОТ-ПЦР показал присутствие мРНК рецепторов CB 1 и CB 2 в отсортированных по FAC клетках линии OL. (b – g) SR 1 (SR-141716A) или SR 2 (SR-144528), селективные антагонисты каннабиноидных рецепторов CB 1 или CB 2 , соответственно, вводились в дозе 2 мг / кг за 30 минут до THC к P6 CNPДетенышей мышей -mGFP в течение четырех дней подряд (P6 – P9) и ткань анализировали на P15 в SCWM. (б) анализ иммунофлуоресценции и количественное определение СС1 + плотности клеток (с), процентом CC1 + в OLIG2 + клетки (D), и СС1 + CNP -mGFP + плотность клеток (е) при Р15 в водном хозяйстве. (f, g) Вестерн-блоттинг и количественная оценка уровней белка миелина в экстрактах SCWM на P15. Уровни белка были нормализованы к внутреннему контролю α-тубулина, относящемуся к группе, получавшей Veh, и выражены в произвольных единицах (а.е.). Данные представлены как средние значения ± SEM . n = 3–4 животных для (b, c, d) и n = 3–6 животных для (f, g). * п<0,05, ** p <0,01, *** p <0,001 по сравнению с мышами, получавшими Veh; # p <.05, ## p <.01, ### p <.001 по сравнению с мышами, получавшими THC. Масштабные линейки: (а) = 20 мкм. SCWM, подкорковое белое вещество; THC, Δ 9 -тетрагидроканнабинол; Veh, автомобиль

3.5 ТГК модулирует миелинизацию ЦНС, активируя ось Akt / mTORC1

В последние годы в нескольких исследованиях сообщается о роли сигнального пути Akt / mTORC1 (протеинкиназа B, PKB / млекопитающее, мишень комплекса 1 рапамицина) как важного модулятора дифференцировки OL и миелинизации ЦНС (Gaesser & Fyffe-Maricich, 2016 ; Wood et al., 2013 ). Действительно, каннабиноидные рецепторы, связанные с белком CB 1 и CB 2 G, регулируют этот сигнальный путь в нескольких типах нервных клеток, включая нейроны, нейробласты, клетки глиомы, клетки-предшественники нейронов и OPC (Blazquez et al., 2015 ; Diaz-Alonso et al. al., 2015 ; Gomez et al., 2015 ; Palazuelos, Ortega, Diaz ‐ Alonso, Guzman, & Galve ‐ Roperh, 2012 ; Puighermanal et al.,2009 ; Салазар и др., 2009 ). Таким образом, мы исследовали участие сигнального пути Akt / mTORC1 в THC-индуцированном развитии OL и миелинизации ЦНС. ТГК или носитель вводили детенышам P6 в течение четырех дней подряд, и SCWM анализировали на P15. Вестерн-блот-анализ экстрактов SCWM выявил повышенные уровни фосфорилирования нескольких репрезентативных белков считывания оси Akt / mTORC1, таких как Akt, p70 киназа рибосомного белка S6 (p70S6K), рибосомный белок S6 и фактор инициации трансляции эукариот 4E-BP1 у мышей, получавших THC, как по сравнению с животными, получавшими носитель (рис. 5а, б ). В соответствии с этими данными иммунофлуоресцентная характеристика показала, что введение THC увеличивает pAkt + (рис. 5c ) и pS6.+ (Рис. 5d, f ) CC1 + OLs в SCWM по сравнению с контрольной группой. Следовательно, введение THC активирует сигнальный путь Akt / mTORC1 в клетках линии OL in vivo.

Тетрагидроканнабинол способствует развитию олигодендроцитов и миелинизации ЦНС
РИСУНОК 5THC модулирует миелинизацию ЦНС, активируя сигнальный путь Akt / mTORC1. Ингибитор mTORC1 темсиолимус (Tem) вводили в дозе 5 мг / кг за 30 минут до ТГК детенышам P6 в течение четырех дней подряд, а ткань анализировали на P15 в SCWM. (a, b) Вестерн-блоттинг и количественная оценка активации нескольких осевых белков Akt / mTORC1 (pAkt, pP70S6K, pS6 и p4E-BP1) экстрактов SCWM от мышей, обработанных Veh- или THC, на P15. (c) Мышей CNP- mGFP иммуноокрашивали на pAKT и CC1. (д-з) анализ иммунофлуоресценции с анти-CC1 и PS6 антител и количественный анализ СС1 + плотности клеток (е), процент PS6 + в CC1 + клеток (F), процент от CC1 + в OLIG2 + клеток (г), иCNP- mGFP иммунореактивность (IR) (h) в SCWM мышей, получавших CNP- mGFP, на P15. (i, j) Вестерн-блоттинг и количественная оценка уровней белка миелина (MAG, MOG, CNP) в экстрактах SCWM от обработанных мышей на P15. Уровни белка были нормализованы к внутреннему контролю α-тубулина, относящемуся к группе, получавшей Veh, и выражены в произвольных единицах (а.е.). Данные представлены как средние значения ± SEM . n = 3 животных на экспериментальную группу. Масштабные линейки: (c) = 5 мкм, (d) = 20 мкм. * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001 по сравнению с мышами, получавшими Veh; ## p <.01, ### p<0,001 по сравнению с мышами, получавшими ТГК. mTORC1, мишень рапамицинового комплекса 1 у млекопитающих; SCWM, подкорковое белое вещество; темсиролимус, Tem; THC, Δ 9 -тетрагидроканнабинол; 

Чтобы оценить участие передачи сигнала mTORC1 в дифференцировке OL, индуцированной THC, мы вводили ингибитор mTORC1 темсиролимус (Tem, 2,5 мг / кг), отдельно или в комбинации с ТГК (за 30 минут до ТГК), один раз в день в течение четырех дней. последовательных дней, и проанализировали постнатальный олигодендрогенез и миелинизацию SCWM. Иммунофлуоресцентный анализ в SCWM показал, что фармакологическая блокада mTORC1 предотвращает влияние THC на развитие OL. Таким образом, введение темсиролимус аннулировал ТНС-индуцированное увеличение СС1 + плотность клеток и PS6 + число клеток в СС1 + клеточной популяции (рис 5d-г ). Наконец, темсиролимус также эффективно предотвращал вызванное ТГК увеличение CNP.-MGFP реактивность в срезах ткани (рис. 5d, h ) и уровни белка миелина в SCWM (рис. 5i, j ). Таким образом, эти находки показывают, что ТГК модулирует развитие OL и миелинизацию SCWM, по крайней мере частично, путем активации пути передачи сигналов Akt / mTORC1 в клетках линии OL.

Like
Like Love Haha Wow Sad Angry
Предыдущий пост

Исследование рассеянного склероза показало, что микробиом кишечника является потенциальным источником заболевания

Следующая запись

Пероральное лечение на основе каннабидиола, способствующее развитию ремиелинизации у мышей

Следующая запись
Пероральное лечение на основе каннабидиола, способствующее развитию ремиелинизации у мышей

Пероральное лечение на основе каннабидиола, способствующее развитию ремиелинизации у мышей

  • Популярные
  • Комментарии
  • Последние
Должен ли я беспокоиться о коронавирусе, если у меня рассеянный склероз (РС)?

Должен ли я беспокоиться о коронавирусе, если у меня рассеянный склероз (РС)?

31.05.2020
Рассеянный склероз ошибочный диагноз

Рассеянный склероз ошибочный диагноз

16.10.2021
Опубликованы новые данные клинических испытаний экспериментальной терапевтической вакцины против РС, Xemys

Новый препарат для лечения рассеянного склероза разработан в России Ксемус

26.11.2019
Вред контраста при МРТ исследованиях

Вред контраста при МРТ исследованиях

06.04.2019
Изменения в структуре миелина причина развития рассеянного склероза

Изменения в структуре миелина причина развития рассеянного склероза

4
Опубликованы новые данные клинических испытаний экспериментальной терапевтической вакцины против РС, Xemys

Новый препарат для лечения рассеянного склероза разработан в России Ксемус

4
офатумумаб

Как работает офатумумаб?

3
Опубликованы новые данные клинических испытаний экспериментальной терапевтической вакцины против РС, Xemys

Опубликованы новые данные клинических испытаний экспериментальной терапевтической вакцины против РС, Xemys

3
Почему у кошек не бывает рассеянного склероза

Почему у кошек не бывает рассеянного склероза

15.04.2025
Клеточная иммунотерапия ATA188, показывающая безопасность, намеки на эффективность при прогрессирующем рассеянном склерозе в фазе 1 испытания

Вирус Эпштейна-Барр может вызывать рассеянный склероз, нарушая регуляцию определенных иммунных клеток

13.03.2025
Пациенты с РС, получающие терапию анти-CD20, имеют устойчивый Т-клеточный ответ на вакцинацию против SARS-CoV-2.

ACTRIMS 2025: иммунные профили указывают на реактивацию ВЭБ при рецидивах РС

11.03.2025
Рассеянный склероз? нет адренолейкодистрофия!

Медленно расширяющиеся очаги рассеянного склероза связаны с повреждением миелина в головном мозге

11.03.2025


© 2020 Медицинский журнал «g35.club». Медицинский сайт все о рассеяном склерозе. Вся Информация на данном сайте не должна использоваться для самостоятельной диагностики и лечения и не может быть заменой очной онсультации врача.
Пользовательское соглашение и политика конфиденциальности

Последние новости

Почему у кошек не бывает рассеянного склероза

Почему у кошек не бывает рассеянного склероза

15.04.2025
Клеточная иммунотерапия ATA188, показывающая безопасность, намеки на эффективность при прогрессирующем рассеянном склерозе в фазе 1 испытания

Вирус Эпштейна-Барр может вызывать рассеянный склероз, нарушая регуляцию определенных иммунных клеток

13.03.2025
  • о журнале
  • контакты
  • Помощь «Журналу G35»

© 2018-2020 сайт журнал "G35.club" Медицинский сайт все о рассеяном склерозе.

Нет Результата
Посмотреть все результаты
  • Рассеянный Склероз
    • Симптомы РС
    • Исследования РС
    • Лечение РС
    • Восстановление
    • Разгадка тайн РС
    • Случай-X
    • Мнение эксперта
    • Нетрадиционные подходы
  • МРТ
  • Альцгеймер
  • БАС
  • Паркинсон
  • ПИТАНИЕ
  • Нейро обзор
  • Вебинары
  • Помощь

© 2018-2020 сайт журнал "G35.club" Медицинский сайт все о рассеяном склерозе.

sponsored
Этот веб-сайт использует файлы cookie. Продолжая использовать этот сайт, вы даете согласие на использование файлов cookie. Посетите ссылку Политику конфиденциальности и использования файлов cookie .